ผู้เชี่ยวชาญทางการแพทย์ของบทความ
สิ่งตีพิมพ์ใหม่
กล้องจุลทรรศน์แบบคอนโฟคอลอายุใช้งานของกระจกตา
ตรวจสอบล่าสุด: 06.07.2025
เนื้อหา iLive ทั้งหมดได้รับการตรวจสอบทางการแพทย์หรือตรวจสอบข้อเท็จจริงเพื่อให้แน่ใจว่ามีความถูกต้องตามจริงมากที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้
เรามีแนวทางการจัดหาที่เข้มงวดและมีการเชื่อมโยงไปยังเว็บไซต์สื่อที่มีชื่อเสียงสถาบันการวิจัยทางวิชาการและเมื่อใดก็ตามที่เป็นไปได้ โปรดทราบว่าตัวเลขในวงเล็บ ([1], [2], ฯลฯ ) เป็นลิงก์ที่คลิกได้เพื่อการศึกษาเหล่านี้
หากคุณรู้สึกว่าเนื้อหาใด ๆ ของเราไม่ถูกต้องล้าสมัยหรือมีข้อสงสัยอื่น ๆ โปรดเลือกแล้วกด Ctrl + Enter
การใช้กล้องจุลทรรศน์คอนโฟคัลของกระจกตาเป็นวิธีการวิจัยสมัยใหม่วิธีหนึ่ง ช่วยให้สามารถตรวจสอบกระจกตาภายในร่างกายได้ พร้อมทั้งสร้างภาพเนื้อเยื่อในระดับเซลล์และโครงสร้างจุลภาคได้
วิธีนี้เป็นการออกแบบกล้องจุลทรรศน์ดั้งเดิมและมีกำลังการแยกสูง ทำให้สามารถมองเห็น เนื้อเยื่อ กระจกตา ที่มีชีวิต วัดความหนาของแต่ละชั้น และประเมินระดับความผิดปกติทางสัณฐานวิทยาได้
วัตถุประสงค์ของการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบคอนโฟคอลกระจกตา
เพื่อศึกษาลักษณะการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาของกระจกตาที่เกิดขึ้นในโรคอักเสบและ โรค เสื่อม ต่างๆ ตลอดจนผลจากการผ่าตัดและการสัมผัสกับ CL
ข้อมูลการตรวจทางสัณฐานวิทยามีความจำเป็นเพื่อประเมินความรุนแรงของกระบวนการทางพยาธิวิทยา ประสิทธิผลของการรักษา และเพื่อกำหนดกลยุทธ์ในการจัดการผู้ป่วย
ตัวบ่งชี้สำหรับขั้นตอน
- โรคอักเสบของกระจกตา ( keratitis )
- โรคกระจกตาเสื่อม ( keratoconus, Fuchs dystrophyเป็นต้น)
- โรคตาแห้ง.
- ภาวะหลังการผ่าตัดกระจกตา ( การผ่าตัดปลูกถ่ายกระจกตา แบบเจาะทะลุ, การผ่าตัดแก้ไขสายตาผิดปกติด้วยกระจกตา)
- สภาวะที่เกี่ยวข้องกับการใส่คอนแทคเลนส์
เทคนิค กล้องจุลทรรศน์คอนโฟคัลของกระจกตา
การศึกษานี้ดำเนินการโดยใช้กล้องจุลทรรศน์แบบคอนโฟคอล ConfoScan 4 (Nider) ที่มีกำลังขยาย 500 เท่า อุปกรณ์นี้ช่วยให้ตรวจสอบกระจกตาได้ตลอดทั้งความหนา
ขนาดของพื้นที่ที่ตรวจคือ 440×330 μm ความหนาของชั้นสแกนคือ 5 μm นำเลนส์ที่มีเจลหยดหนึ่งมาวางบนกระจกตาจนกระทั่งเลนส์สัมผัสกัน จากนั้นจึงติดตั้งโดยให้ความหนาของชั้นของเหลวแช่อยู่ที่ 2 มม. การออกแบบของอุปกรณ์ช่วยให้สามารถตรวจสอบกระจกตาในบริเวณส่วนกลางและบริเวณพาราเซ็นทรัลได้
สมรรถนะปกติ
ภาพปกติของกระจกตา
เยื่อบุผิวด้านหน้าประกอบด้วยเซลล์ 5-6 ชั้น ความหนาเฉลี่ยของเยื่อบุผิวทั้งหมดอยู่ที่ประมาณ 50 ไมโครเมตร เมื่อพิจารณาจากโครงสร้างทางสัณฐานวิทยา จะพบว่าชั้นต่างๆ ต่อไปนี้ (จากภายในสู่ภายนอก) มีลักษณะแตกต่างกัน ได้แก่ เซลล์ฐาน เซลล์รูปลิ่ม และเซลล์ผิวเผิน
- ชั้นในสุด (ชั้นฐาน) แสดงด้วยเซลล์ทรงกระบอกขนาดเล็กหนาแน่นไม่มีนิวเคลียสที่มองเห็นได้ ขอบเขตของเซลล์ฐานมีความชัดเจนและสว่าง
- ชั้นกลางประกอบด้วยเซลล์ที่มีหนาม (มีปีก) 2-3 ชั้นซึ่งมีรอยบุ๋มลึกเข้าไปซึ่งเป็นที่ที่เซลล์ข้างเคียงฝังตัวอยู่ เมื่อดูด้วยกล้องจุลทรรศน์ ขอบเขตของเซลล์สามารถแยกแยะได้ค่อนข้างชัดเจน และอาจไม่สามารถระบุนิวเคลียสได้หรืออาจไม่ชัดเจน
- ชั้นผิวเผินของเยื่อบุผิวประกอบด้วยเซลล์หลายเหลี่ยมหนึ่งหรือสองชั้นที่มีขอบเขตชัดเจนและความหนาแน่นสม่ำเสมอ นิวเคลียสมักจะสว่างกว่าไซโทพลาซึม ซึ่งสามารถแยกแยะวงแหวนสีเข้มรอบนิวเคลียสได้เช่นกัน
เซลล์ของชั้นผิวเผินสามารถแยกได้เป็นเซลล์สีเข้มและเซลล์สีอ่อน ความสามารถในการสะท้อนแสงที่เพิ่มขึ้นของเซลล์เยื่อบุผิวบ่งชี้ว่าอัตราการเผาผลาญลดลงและเริ่มมีการลอกผิว
เยื่อหุ้มโบว์แมนเป็นโครงสร้างโปร่งใสซึ่งไม่สะท้อนแสง ดังนั้นโดยปกติจึงไม่สามารถมองเห็นได้ด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบคอนโฟคัล
กลุ่มเส้นประสาทใต้ฐานจะอยู่ใต้เยื่อโบว์แมน โดยปกติแล้ว เส้นใยประสาทจะปรากฏเป็นแถบสีสว่างวิ่งขนานกันบนพื้นหลังสีเข้ม โดยสัมผัสกัน การสะท้อนแสง (reflectivity) อาจไม่สม่ำเสมอตลอดเส้นใย
เนื้อเยื่อเกี่ยวพันของกระจกตาครอบคลุมความหนา 80 ถึง 90% ของกระจกตาและประกอบด้วยส่วนประกอบของเซลล์และส่วนประกอบภายนอกเซลล์ ส่วนประกอบของเซลล์หลักของเนื้อเยื่อเกี่ยวพันคือเซลล์กระจกตา ซึ่งคิดเป็นประมาณ 5% ของปริมาตร
ภาพจุลทรรศน์ทั่วไปของเนื้อเยื่อเกี่ยวพันประกอบด้วยส่วนต่างๆ ที่มีรูปร่างเป็นวงรีไม่สม่ำเสมอและสว่างหลายส่วน (นิวเคลียสของเซลล์เคอราโทไซต์) ซึ่งอยู่ในความหนาของเมทริกซ์สีเทาเข้มหรือสีดำโปร่งใส โดยปกติแล้ว การมองเห็นโครงสร้างนอกเซลล์ไม่สามารถทำได้เนื่องจากโครงสร้างเหล่านี้โปร่งใส เนื้อเยื่อเกี่ยวพันสามารถแบ่งได้ตามเงื่อนไขเป็นชั้นย่อย ได้แก่ ชั้นหน้า (อยู่ใต้เยื่อโบว์แมนโดยตรงและคิดเป็นร้อยละ 10 ของความหนาของเนื้อเยื่อเกี่ยวพัน) ชั้นหน้า-กลาง ชั้นกลาง และชั้นหลัง
ความหนาแน่นเฉลี่ยของเซลล์กระจกตาจะสูงกว่าในเนื้อเยื่อเกี่ยวพันด้านหน้า โดยจะค่อยๆ ลดลงเมื่อเข้าใกล้ชั้นหลัง ความหนาแน่นของเซลล์กระจกตาด้านหน้าจะสูงกว่าเซลล์กระจกตาด้านหลังเกือบสองเท่า (หากความหนาแน่นของเซลล์กระจกตาด้านหน้าเท่ากับ 100% ความหนาแน่นของเซลล์กระจกตาด้านหลังจะอยู่ที่ประมาณ 53.7%) ในเนื้อเยื่อเกี่ยวพันด้านหน้า นิวเคลียสของเซลล์กระจกตาจะมีรูปร่างกลมคล้ายเมล็ดถั่ว ในขณะที่ในเนื้อเยื่อเกี่ยวพันด้านหลังจะมีรูปร่างเป็นวงรีและยาวกว่า
นิวเคลียสของเซลล์กระจกตาอาจมีความสว่างแตกต่างกัน ความสามารถในการสะท้อนแสงที่แตกต่างกันนั้นขึ้นอยู่กับสถานะการเผาผลาญของเซลล์ เซลล์ที่มีความสว่างมากกว่าจะถือว่าเป็นเซลล์กระจกตาที่ถูกกระตุ้น (เซลล์ "เครียด") ซึ่งมีกิจกรรมเพื่อรักษาสมดุลภายในของกระจกตา ในบริเวณปกติและบริเวณการมองเห็น จะพบเซลล์ที่ถูกกระตุ้นเพียงเซลล์เดียว
เส้นใยประสาทในเนื้อเยื่อเกี่ยวพันของกระจกตาส่วนหน้าจะมองเห็นเป็นแถบสว่างที่เป็นเนื้อเดียวกัน มักก่อตัวเป็นเส้นแยก
โดยปกติแล้วเยื่อเดสเซเมตจะโปร่งใสและไม่สามารถมองเห็นได้ด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบคอนโฟคัล
เยื่อบุผิวส่วนหลังเป็นเซลล์ชั้นเดียวที่แบนเป็นรูปหกเหลี่ยมหรือรูปหลายเหลี่ยม มีพื้นผิวสีสว่างสม่ำเสมอบนพื้นหลังที่เป็นขอบเขตระหว่างเซลล์ที่ชัดเจนและมืด
อุปกรณ์นี้มีความสามารถในการคำนวณความหนาแน่นของเซลล์ พื้นที่ และค่าสัมประสิทธิ์ความแปรปรวนด้วยตนเองหรืออัตโนมัติ
การเปลี่ยนแปลงทางพยาธิวิทยาในโครงสร้างของกระจกตา
โรคกระจกตาโป่งพองมีลักษณะเฉพาะคือมีการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญในเยื่อบุผิวด้านหน้าและเนื้อเยื่อเกี่ยวพันของกระจกตา
[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]