กล้องจุลทรรศน์ในหลอดอาหาร confocal ของกระจกตา

การตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ Confocal ของกระจกตาเป็นหนึ่งในวิธีการตรวจสอบที่ทันสมัย ช่วยให้สามารถตรวจสอบกระจกตาได้ด้วยการมองเห็นเนื้อเยื่อภายในเซลล์ประสาทและระดับจุลภาค

วิธีนี้เนื่องจากการออกแบบเดิมของกล้องจุลทรรศน์และความละเอียดสูงช่วยให้สามารถมองเห็นเนื้อเยื่อกระจกตาที่มีชีวิตเพื่อวัดความหนาของแต่ละชั้นและเพื่อประเมินระดับความผิดปกติทางสัณฐานวิทยา

วัตถุประสงค์ของการใช้กล้องจุลทรรศน์โฟกัสของกระจกตา

ลักษณะการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาในกระจกตาที่เกิดจากโรคอักเสบและdystrophicต่างๆรวมทั้งจากการแทรกแซงการผ่าตัดและผลกระทบของ CR

ข้อมูลทางสัณฐานวิทยาเป็นสิ่งจำเป็นในการประเมินความรุนแรงของกระบวนการทางพยาธิวิทยาประสิทธิผลของการรักษาและกำหนดยุทธวิธีในการจัดการผู้ป่วย

ตัวบ่งชี้สำหรับขั้นตอน

• โรคอักเสบของกระจกตา ( keratitis )
• โรค Dystrophic ของกระจกตา ( keratoconus, Fuchs's dystrophyฯลฯ )
• "ตาแห้ง" ซินโดรม
• ภาวะแทรกซ้อนหลังการผ่าตัดที่กระจกตา (ผ่านการปลูกถ่ายกระจกตาการผ่าตัดรูรั่ว)
• เงื่อนไขที่เกี่ยวข้องกับการสวมใส่คอนแทคเลนส์

[1], [2], [3], [4]

การจัดเตรียม

การศึกษานี้เป็นไปได้โดยไม่ต้องใช้ยาชา หยดของเหลวฝังอยู่บนเลนส์ของเลนส์กล้องจุลทรรศน์คอนแทค นี้ช่วยลดการสัมผัสโดยตรงของเลนส์กับกระจกตาและลดความเสี่ยงของความเสียหายที่เป็นเยื่อบุผิว

[5], [6], [7], [8], [9],

เทคนิค กล้องจุลทรรศน์โฟกัสของกระจกตา

การศึกษานี้ทำในกล้องจุลทรรศน์แบบคอนแทค ConfoScan 4 (Nider) โดยเพิ่มขึ้น 500 เท่า อุปกรณ์ช่วยให้คุณสามารถตรวจสอบกระจกตาได้มากกว่าความหนาทั้งหมด

ขนาดของพื้นที่ที่ศึกษาคือ 440 × 330 μmความหนาของชั้นการสแกนคือ 5 μm เลนส์ที่มีหยดเจลจะถูกนำมาที่กระจกตาเพื่อสัมผัสและตั้งค่าเพื่อให้ความหนาของชั้นของเหลวแช่อยู่ที่ 2 มิลลิเมตร การออกแบบอุปกรณ์ช่วยให้คุณสามารถตรวจสอบกระจกตาในบริเวณกลางและบริเวณพาราเซตามอลได้

การคัดค้านขั้นตอน

การคัดค้านทางสัมพัทธ์ทำเครื่องหมายการระคายเคืองต่อตาของกระบวนการอักเสบเฉียบพลัน

[10], [11]

สมรรถนะปกติ

ภาพทางสัณฐานวิทยาของกระจกตาปกติ

เยื่อบุผิวหน้าประกอบด้วยเซลล์ 5-6 ชั้น ความหนาเฉลี่ยของเยื่อบุผิวทั้งหมดประมาณ 50 ไมโครเมตร ตามโครงสร้างทางสัณฐานวิทยาชั้นต่างๆดังต่อไปนี้มีความโดดเด่น (จากด้านในออกไปด้านนอก): ฐาน, รูปทรง subulate และผิวเผิน

• ชั้นด้านในสุด (ฐาน) เป็นตัวแทนจากเซลล์ทรงกระบอกขนาดเล็กที่หนาแน่นและไม่มีนิวเคลียสที่มองเห็นได้ เส้นขอบของเซลล์รากฐานมีความชัดเจนสดใส
• ชั้นกลางประกอบด้วยเซลล์กระดูกปีกแหลม (2-3 ชั้น) ที่มีการบุกรุกลึกซึ่งจะมีการเจริญเติบโตของเซลล์ที่อยู่ใกล้เคียง ขอบเขตของเซลล์มีความแตกต่างกันมากและนิวเคลียสอาจไม่ได้ถูกกำหนดหรือเลือนลาง
• ชั้นผิวของเยื่อบุผิวจะถูกแสดงโดยหนึ่งหรือสองชั้นของเซลล์เหลี่ยมที่มีขอบเขตชัดเจนและความหนาแน่นเป็นเนื้อเดียวกัน นิวเคลียสมักจะสว่างกว่า cytoplasm ซึ่งสามารถแยกแยะความแตกต่างของวงแหวนมืดที่มีนิวเคลียสใกล้ได้

ระหว่างเซลล์ของชั้นผิวแตกต่างระหว่างความมืดและแสง การสะท้อนแสงที่เพิ่มขึ้นของเซลล์เยื่อบุผิวแสดงถึงการลดระดับของการเผาผลาญอาหารในตัวพวกเขาและจุดเริ่มต้นของการทำลายเนื้อเยื่อ

เมมเบรน Bowman เป็นโครงสร้างโปร่งใสที่ไม่สะท้อนแสงดังนั้นจึงไม่สามารถเห็นภาพได้เมื่อใช้กล้องจุลทรรศน์แบบผสมผสาน

เส้นประสาทใต้ตาข่ายอยู่ภายใต้เมมเบรน Bowman โดยปกติแล้วเส้นใยประสาทจะมีลักษณะเป็นแถบสว่างที่วิ่งแบบคู่ขนานบนพื้นหลังที่มืดซึ่งติดต่อกันและกัน ความสะท้อน (reflectivity) อาจไม่สม่ำเสมอในความยาวของเส้นใย

ตาของกระจกตามีความหนาประมาณ 80 ถึง 90% ของความหนาของกระจกตาและประกอบด้วยส่วนประกอบของเซลล์และภายนอกเซลล์ องค์ประกอบของเซลล์ขั้นพื้นฐานของ stroma คือ keratocytes; เป็นประมาณ 5% ของปริมาณ

รูปแบบกล้องจุลทรรศน์ทั่วไปของ stroma ประกอบด้วยรูปร่างรูปทรงรีรูปไข่ที่ไม่สม่ำเสมอหลายจุด (keratocyte nuclei) ที่อยู่ในความหนาของสีเทาหรือสีดำโปร่งใสเมทริกซ์ โดยปกติการมองเห็นโครงสร้างภายนอกเซลล์เป็นไปไม่ได้เนื่องจากความโปร่งใส Stroma สามารถแบ่งออกเป็นชั้นย่อยได้อย่างถูกต้องตามเงื่อนไข: หน้า (ตั้งอยู่ใต้แผ่นเยื่อ Bowman และมีความหนา 10% ของ Stroma) ส่วนหน้าตรงกลางและด้านหลัง

ความหนาแน่นเฉลี่ยของ keratocytes สูงกว่าใน stroma ด้านหน้าค่อยๆลดจำนวนลงไปทางด้านหลังชั้น ความหนาแน่นของเซลล์ stromal Anterior เกือบสองเท่าสูงกว่าเซลล์ stromal หลัง (ถ้าความหนาแน่นของเซลล์ของ stroma ด้านหน้านำมาเป็น 100% แล้วความหนาแน่นของด้านหลังรอบ 53.7% ของเซลล์) ใน stroma ด้านหน้านิวเคลียสของ keratocytes มีรูปร่างคล้ายถั่วกลมและในรูปไข่หลังและยาวมากขึ้น

นิวเคลียสของ keratocytes อาจแตกต่างกันในความสว่าง ความสามารถในการสะท้อนแสงแตกต่างกันขึ้นอยู่กับสถานะการเผาผลาญของร่างกาย เซลล์ที่สว่างขึ้นจะถูกพิจารณาให้เป็นคีโตเซต ("stress cells") ซึ่งมีกิจกรรมเพื่อรักษา homeostasis ภายใน ในบรรทัดฐานและมุมมองมีเซลล์เดียวที่เปิดใช้งาน

เส้นใยประสาทในกระจกตาด้านหน้าของกระจกตาจะมองเห็นเป็นแถบที่เป็นเนื้อเดียวกันที่สดใสซึ่งมักสร้างเป็นชิ้นส่วน

เมมเบรน descemet เป็นปกติโปร่งใสและไม่ได้เห็นภาพโดยกล้องจุลทรรศน์แบบผสมผสาน

เยื่อบุด้านหลังเป็นแบบเดียวกับเซลล์ผิวแบนหกเหลี่ยมหรือเหลี่ยมที่มีพื้นผิวอ่อนสม่ำเสมอต่อพื้นหลังของรอยต่อระหว่างเซลล์ที่แตกต่างกัน

อุปกรณ์นี้มีความเป็นไปได้ที่จะคำนวณความหนาแน่นของเซลล์หรือแบบอัตโนมัติได้โดยอัตโนมัติหรือใช้พื้นที่และสัมประสิทธิ์ของความแปรปรวน

การเปลี่ยนแปลงทางพยาธิวิทยาในโครงสร้างของกระจกตา

Keratoconus เป็นลักษณะการเปลี่ยนแปลงที่สำคัญในเยื่อบุผิวและ stroma ของกระจกตา

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20]