การทดสอบยูรีเอส 13c: การเตรียมตัว ผลลัพธ์ ผลบวก ผลลบ

นับตั้งแต่มีการค้นพบแบคทีเรีย Helicobacter pylori ที่เกี่ยวข้องกับโรคกระเพาะเรื้อรังและแผลในกระเพาะอาหารและลำไส้เล็กส่วนต้น วิธีการวินิจฉัยก็ได้รับการพัฒนาขึ้น รวมถึงการทดสอบยูรีเอส ซึ่งช่วยให้ตรวจจับจุลินทรีย์เหล่านี้ในผู้ป่วยรายบุคคล ยืนยันการมีส่วนเกี่ยวข้องของจุลินทรีย์เหล่านี้ในการพัฒนาโรคทางเดินอาหาร และกำหนดการรักษาที่มีประสิทธิผล

เอนไซม์ยูรีเอสเป็นไบโอมาร์กเกอร์ของการติดเชื้อเฮลิโคแบคเตอร์

แบคทีเรีย H. pylori ปกป้องตัวเองจากสภาพแวดล้อมที่มีกรดในช่องว่างของกระเพาะอาหารด้วยสองวิธี วิธีแรกคือ จุลินทรีย์จะเข้าถึงชั้นล่างสุดของเยื่อเมือกโดยทำลายด้วยแฟลกเจลลา ซึ่งลงไปจนถึงเซลล์เยื่อบุผิวซึ่งมีค่า pH สูงกว่า (กล่าวคือ ความเป็นกรดต่ำกว่า) วิธีที่สองคือ แบคทีเรียจะทำให้กรดเป็นกลางโดยสังเคราะห์เอนไซม์เมทัลโลเอนไซม์ที่มีโมเลกุลสูงที่มีฤทธิ์เร่งปฏิกิริยาสูงอย่างยูเรียสหรือยูเรียอะมิดโดไฮโดรเลสในปริมาณมาก

การใช้ยูรีเอสในการวินิจฉัยเชื้อเฮลิโคแบคเตอร์เป็นไปได้เนื่องจากไม่เพียงแต่กิจกรรมในไซโทพลาสซึมของเอนไซม์นี้เท่านั้น แต่ยังรวมถึงปฏิสัมพันธ์ภายนอกกับเซลล์โฮสต์ด้วย

ภายใต้การทำงานของยูเรียส ยูเรียในกระเพาะจะสลายตัวเป็นไฮโดรเจนไนไตรด์ (แอมโมเนีย) และคาร์บอนไดออกไซด์ (คาร์บอนไดออกไซด์) ยูเรียจะทำปฏิกิริยากับกรดไฮโดรคลอริกในน้ำย่อยของกระเพาะและสร้างโซนของกรดที่เป็นกลางรอบๆ เชื้อ H. pylori และยังช่วยสนับสนุนการเผาผลาญของเซลล์แบคทีเรียอีกด้วย

ดังนั้นยูเรียสจึงเป็นปัจจัยที่สำคัญที่สุดในการตั้งรกรากของเชื้อ H. pylori ในเยื่อบุกระเพาะอาหารของมนุษย์ และการตรวจหาฤทธิ์ในการสลายยูเรียสถือเป็นไบโอมาร์กเกอร์ของความรุนแรงของแบคทีเรียชนิดนี้ ซึ่งแพทย์ระบบทางเดินอาหารจะใช้การทดสอบยูเรียสเพื่อวินิจฉัยการติดเชื้อเฮลิโคแบคเตอร์ รวมถึงติดตามผลการทำลาย (การกำจัด) แบคทีเรียด้วยยา

การวินิจฉัยเชื้อ H. pylori มีทั้งการทดสอบแบบรุกรานและไม่รุกราน ขึ้นอยู่กับว่าจำเป็นต้องตรวจกระเพาะอาหารด้วยกล้อง (fibrogastroduodenoscopy) หรือไม่ การทดสอบรุกรานคือการทดสอบยูเรียอย่างรวดเร็วหรือการทดสอบยูเรียอย่างรวดเร็ว (RUT-test) ซึ่งต้องเก็บตัวอย่างเนื้อเยื่อ (biopsy) การทดสอบลมหายใจด้วยยูเรีย 13C (13C-UBT) เป็นการทดสอบแบบไม่รุกรานที่พบบ่อยที่สุด

โปรดทราบว่าการวินิจฉัยเชื้อ H. pylori แบบไม่รุกรานสามารถทำได้โดยใช้การตรวจเลือดเพื่อหาแอนติบอดี (ความจำเพาะที่ระดับ 75% ความไว - 84%) การตรวจ ELISA ในปัสสาวะ (ความไว 96% และความจำเพาะ 79%) และโปรแกรมร่วมสำหรับแอนติเจนแบคทีเรีย ข้อมูลเพิ่มเติม - การติดเชื้อ Helicobacter pylori: แอนติบอดีต่อเชื้อ Helicobacter pylori ในเลือด

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

ตัวบ่งชี้สำหรับขั้นตอน การทดสอบยูรีเอส

การที่เชื้อ H. pylori เข้าไปตั้งรกรากในเยื่อบุกระเพาะอาหารนั้นไม่ถือเป็นโรค แต่เป็นปัจจัยหนึ่งที่ทำให้มีแบคทีเรียบางชนิดในร่างกายเพิ่มมากขึ้น ซึ่งภายใต้เงื่อนไขบางประการ อาจกระตุ้นให้เกิดโรคต่างๆ ของกระเพาะอาหารและทางเดินอาหารส่วนบนได้

ข้อบ่งชี้ในการวินิจฉัยการติดเชื้อ Helicobacter โดยเฉพาะการทดสอบยูเรียสนั้นเกี่ยวข้องกับโรคกระเพาะที่มีกรดสูง โรคกระเพาะอักเสบแบบแอนทรัลและแบบฝ่อ ลำไส้เล็กส่วนต้นอักเสบ แผลในกระเพาะอาหารและแผลในลำไส้เล็กส่วนต้น มะเร็งต่อมน้ำเหลืองในกระเพาะอาหารชนิด MALT หลังจากการผ่าตัดมะเร็งกระเพาะอาหารระยะเริ่มต้นด้วยกล้อง สามารถทำการตรวจทางเนื้อเยื่อวิทยาร่วมกับการทดสอบยูเรียสแบบรวดเร็ว (FGDS) กับการทดสอบยูเรียสได้

แพทย์ระบบทางเดินอาหารอาจกำหนดให้ทดสอบยูเรียสหากผู้ป่วยบ่นว่ารู้สึกหนักและไม่สบายในบริเวณลิ้นปี่ มีอาการเสียดท้องบ่อยหลังรับประทานอาหาร เรอเปรี้ยวหรือเน่า มีรสขมในปาก คลื่นไส้ มีความผิดปกติของลำไส้ ปวดหรือปวดเกร็งในกระเพาะอาหาร

[ 8 ], [ 9 ]

การจัดเตรียม

การเตรียมตัวสำหรับการทดสอบลมหายใจด้วยยูเรีย 13C ประกอบด้วยการที่ผู้ป่วยหยุดรับประทานยาปฏิชีวนะ 4 สัปดาห์ก่อนการทดสอบ และยาต้านการอักเสบที่ไม่ใช่สเตียรอยด์ ยาที่ยับยั้งการทำงานของปั๊มโปรตอน (ลดความเป็นกรดในกระเพาะอาหาร) และยาลดกรดหรือสารดูดซับที่ใช้รักษาอาการเสียดท้องอย่างน้อย 2 สัปดาห์ก่อนการทดสอบ ควรหยุดรับประทานยาใดๆ ทั้งสิ้น 5-6 วัน และควรหยุดดื่มแอลกอฮอล์และสูบบุหรี่ 3 วันก่อนการทดสอบ

แนะนำให้หลีกเลี่ยงการรับประทานพืชตระกูลถั่วประมาณหนึ่งสัปดาห์ก่อนการทดสอบ เนื่องจากถั่ว ถั่วลันเตา ถั่วเลนทิล ถั่วเหลือง และถั่วชนิดต่างๆ มียูรีเอส (ซึ่งช่วยปกป้องพืชจากโรคและแมลงศัตรูพืช)

ในตอนเย็นก่อนวันทดสอบ ไม่ควรรับประทานอาหารเย็นมื้อหนักจนเกินไป ในวันที่ทำการทดสอบ ควรดูแลสุขภาพช่องปากตามปกติ และ 1 ชั่วโมงครึ่งก่อนวันทดสอบ ไม่ควรดื่มเครื่องดื่มหรือหมากฝรั่ง

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

เทคนิค การทดสอบยูรีเอส

เทคนิคการใช้งาน:

• ขั้นแรก จะมีการสุ่มตัวอย่างการหายใจพื้นฐาน จากนั้นหายใจออกใส่ภาชนะพลาสติกอ่อน (และปิดผนึกอย่างแน่นหนา)
• ของเหลวที่เติมยูเรีย 13C เข้าไปจะถูกนำมารับประทานทางปาก
• หลังจากผ่านไป 25-30 นาที ตัวอย่างอากาศที่หายใจออกมาชุดที่สองจะถูกนำใส่ภาชนะอื่น

ตัวอย่างที่ได้ด้วยวิธีนี้จะถูกวิเคราะห์ด้วยเครื่องแมสสเปกโตรมิเตอร์โดยแยกไอโซโทปในตัวอย่างที่สองและกำหนดความเข้มข้นของไอโซโทปเหล่านั้น ความแตกต่างระหว่างค่าในตัวอย่างที่สองและตัวอย่างแรกจะแสดงเป็นเดลต้า (δ) เมื่อเทียบกับระดับพื้นฐาน ค่าปกติ เช่น ค่าลบของอะตอม 13C ที่ถูกติดฉลากในผู้ป่วยที่ไม่ติดเชื้อจะแตกต่างกันไปตั้งแต่ 0.15-0.46% และค่าบวกในกรณีที่มีการติดเชื้อจะอยู่ที่ 1.2-9.5% โดยมีอัตราการไฮโดรไลซิสยูเรียมากกว่า 12-14 μg/นาที

พูดอย่างง่ายๆ ก็คือ การตรวจพบก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์ที่มีฉลาก 13C ในอากาศที่หายใจออกนั้น บ่งชี้ว่ายูเรียถูกไฮโดรไลซ์โดยเอนไซม์ยูเรียเอส เอช. ไพโลไร ซึ่งอันที่จริงแล้ว ยืนยันถึงการมีอยู่ของเอนไซม์ดังกล่าวในกระเพาะอาหารได้

การทดสอบลมหายใจด้วย H. pylori

การทดสอบ 13C-UBT หรือการทดสอบลมหายใจด้วยยูเรีย 13C สำหรับเชื้อ Helicobacter pylori เป็นหนึ่งในวิธีการที่ไม่รุกรานที่สำคัญที่สุดในการตรวจหาการติดเชื้อนี้ โดยมีความไว 100% และความจำเพาะ 98% ความเสี่ยงของผลบวกปลอมและผลลบปลอมเมื่อเทียบกับการทดสอบทางเนื้อเยื่อวิทยาและแอนติบอดีในเลือดลดลง 2.3%

การวิเคราะห์นี้ใช้หลักการไฮโดรไลซิสของยูเรียของเหลวที่รับประทานทางปากซึ่งติดฉลากด้วยอะตอมคาร์บอน (ไอโซโทปไม่กัมมันตภาพรังสีที่เสถียร) 13C (ยูเรีย 13C 50-75 มก. เจือจางในของเหลว 100 มล.) ด้วยเอนไซม์ยูเรียของ H. pylori

ยูเรียที่ติดฉลากด้วยตัวบ่งชี้ไอโซโทปจะเกิดการไฮโดรไลซิสในกระเพาะอาหารโดยปล่อยแอมโมเนียและคาร์บอนไดออกไซด์ที่มีอะตอมที่ติดฉลากออกมา ซึ่งจะแพร่กระจายเข้าสู่กระแสเลือดและขับออกจากปอดในระหว่างการหายใจ คาร์บอนไดออกไซด์ที่ติดฉลากจะถูกบันทึกโดยอุปกรณ์วิเคราะห์ ซึ่งก็คือเครื่องสเปกโตรมิเตอร์มวล ซึ่งการทำงานนั้นใช้การสเปกโตรสโคปีแบบเลือกไอโซโทปแบบไม่กระจายตัว หรือเครื่องวิเคราะห์สเปกโตรสโคปีอินฟราเรด

การทดสอบยูเรียสอย่างรวดเร็ว

การทดสอบยูรีเอสแบบรวดเร็ว (RUT) ดำเนินการระหว่างการตรวจด้วยกล้องส่องกระเพาะอาหารและลำไส้เล็กส่วนต้นโดยใช้เครื่องตรวจไฟโบรสโคปที่ทันสมัยและการเก็บตัวอย่างชิ้นเนื้อพร้อมกัน วัสดุชีวภาพควรนำมาจากส่วนแอนทรัลของกระเพาะอาหาร ดังนั้นการตรวจไฟโบรแกสโตรดูโอดีโนสโคปีหรือ FGDS ร่วมกับการทดสอบยูรีเอสจึงเป็นวิธีการวินิจฉัยที่รุกราน

นำชิ้นเนื้อที่ได้ไปแช่ในอาหารเลี้ยงเชื้อมาตรฐานที่เตรียมไว้ โดยประกอบด้วยเจลวุ้น ยูเรีย ฟีนอลซัลโฟฟทาลีน ซึ่งเป็นตัวบ่งชี้กรด-เบส และสารยับยั้งแบคทีเรีย (เติมลงไปเพื่อป้องกันการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ที่ปนเปื้อนและผลบวกปลอม)

หากมีแบคทีเรีย H. pylori อยู่ในตัวอย่างเนื้อเยื่อกระเพาะอาหาร ยูเรียที่ผลิตขึ้นจะย่อยยูเรียและทำให้ค่า pH เพิ่มขึ้น ซึ่งมองเห็นได้ชัดเจนเมื่อตัวบ่งชี้เปลี่ยนจากสีเหลืองเป็นสีส้ม (ที่ pH 6.8) และสีม่วง (ที่ pH> 8) 75% ของการทดสอบที่เป็นบวกจะเปลี่ยนสีภายใน 120-180 นาที และยิ่งตัวบ่งชี้เปลี่ยนสีเร็วเท่าไร จำนวนแบคทีเรียก็จะยิ่งมากขึ้นเท่านั้น แต่การทดสอบที่ผลเป็นลบจะถูกเก็บไว้เป็นเวลา 24 ชั่วโมง

ผลการทดสอบยูรีเอสแบบรวดเร็วเป็นบวก หมายความว่าอย่างไร? ผลการทดสอบ RUT เป็นบวก – ตัวบ่งชี้จะเปลี่ยนเป็นสีแดง – หมายความว่าตัวอย่างชิ้นเนื้อที่วางในอาหารวุ้นมีแบคทีเรีย H. pylori อย่างน้อย 105 ตัว แม้ว่าโดยปกติแล้วความเข้มข้นของแบคทีเรียจะสูงกว่านี้ก็ตาม

ความไวของการดัดแปลงการทดสอบต่างๆ จะแตกต่างกันในช่วง 90-98% และความจำเพาะอยู่ที่ 97-99%

ตามที่แพทย์ระบบทางเดินอาหารได้กล่าวไว้ หากผลสรุปของผู้ป่วยบ่งชี้ว่าผลการทดสอบยูเรียสเป็นบวกอย่างชัดเจน (กากบาทสามอัน) หมายความว่า pH> 8 และตัวบ่งชี้จะเปลี่ยนสีในเวลาน้อยกว่า 60 นาทีนับจากช่วงเวลาที่แช่ชิ้นเนื้อ ซึ่งบ่งชี้ว่ามีเชื้อ H. pylori จำนวนมากและมีการแสดงออกของยูเรียสในระดับสูง สามารถนับจำนวนแบคทีเรียโดยประมาณได้ระหว่างการตรวจชิ้นเนื้อทางจุลพยาธิวิทยาภายใต้กล้องจุลทรรศน์ และหากพบแบคทีเรียเกิน 40-50 ตัวในบริเวณที่มองเห็น แสดงว่าระดับการติดเชื้อสูง

การทดสอบลมหายใจด้วยยูเรีย 13C มักไม่ให้ผลบวกปลอม และในผู้ป่วยที่สงสัยว่ามีแผลในกระเพาะอาหารหรือลำไส้เล็กส่วนต้น การทดสอบผลบวกหนึ่งครั้งถือว่ายืนยันการวินิจฉัยได้ ในขณะที่ผลลบควรได้รับการยืนยันด้วยการตรวจ EGD ด้วยการทดสอบยูเรีย