วิตามินเอในเลือด

ค่าอ้างอิง (บรรทัดฐาน) ของความเข้มข้นของวิตามินเอ (เรตินอล) ในซีรั่มเลือด: ในเด็กอายุ 1-6 ปี - 0.7-1.5 μmol/l, 7-12 ปี - 0.91-1.71 μmol/l, 13-19 ปี - 0.91-2.51 μmol/l; ในผู้ใหญ่ - 1.05-2.09 μmol/l

วิตามินเอเป็นวิตามินที่ละลายในไขมันและมีอยู่ 2 รูปแบบ ได้แก่ วิตามินเอเองหรือเรตินอล (พบได้เฉพาะในผลิตภัณฑ์จากสัตว์) และโปรวิตามินเอที่เรียกว่าแคโรทีน (ได้จากผลิตภัณฑ์จากสัตว์และพืช) ซึ่งสามารถแปลงเป็นเรตินอลได้ที่ผนังทางเดินอาหาร เรตินอลจากอาหารประมาณ 50-90% จะถูกดูดซึมในลำไส้เล็กและส่งผ่านไปยังตับในรูปของคอมเพล็กซ์ที่จับกับไคลโอไมครอน ซึ่งจะถูกเก็บไว้เป็นเรตินอลปาล์มิเตต เมื่อจำเป็น จะถูกปล่อยเข้าสู่กระแสเลือดในรูปของเรตินอลที่จับกับโปรตีนที่จับกับวิตามินเอ ในซีรั่มของเลือด โปรตีนที่จับกับวิตามินเอ + คอมเพล็กซ์เรตินอลจะจับกับทรานสไธเรติน จากซีรั่มของเลือด เรตินอลจะถูกดูดซึมโดยเซลล์เป้าหมาย เช่น โฟโตรีเซพเตอร์ของเรตินาและเยื่อบุผิว

เมื่อร่างกายได้รับวิตามินเอในปริมาณที่เกินความต้องการ (เรตินอล 180-430 ไมโครกรัมต่อวัน ขึ้นอยู่กับอายุ เพศ และสภาพร่างกาย) ส่วนเกินจะถูกสะสมไว้ที่ตับเพื่อเป็นแหล่งสะสมวิตามินชนิดนี้ เมื่อร่างกายได้รับเรตินอลร่วมกับอาหารน้อยลง เรตินอลสำรองจากตับจะถูกปล่อยเข้าสู่กระแสเลือด ทำให้เรตินอลในซีรั่มเลือดมีความเข้มข้นปกติ (มากกว่า 0.7 ไมโครโมลต่อลิตร) วิตามินเอรูปแบบอื่นๆ ที่มีฤทธิ์ทางชีวภาพ (เรตินัลและกรดเรตินอยด์) มีอยู่ในเลือดในปริมาณที่ต่ำมาก (ต่ำกว่า 0.35 ไมโครโมลต่อลิตร) เอสเทอร์เรตินอลคิดเป็นประมาณ 5% ของวิตามินเอทั้งหมด (0.1-0.17 ไมโครโมลต่อลิตร)

วิตามินเอมีบทบาทสำคัญในกระบวนการออกซิเดชัน-รีดักชัน เรตินอลส่งเสริมการสร้างไกลโคเจนในตับและกล้ามเนื้อ ช่วยเพิ่มปริมาณคอเลสเตอรอลในเลือด และมีส่วนร่วมในการสังเคราะห์สเตียรอยด์และฮอร์โมนเพศ วิตามินเอมีความจำเป็นต่อการเจริญเติบโตและการสร้างโครงกระดูก การสังเคราะห์โรดอปซินใหม่ และยังส่งเสริมการทำงานปกติของเยื่อเมือกและเยื่อบุผิวของผิวหนัง ป้องกันเมตาพลาเซีย ภาวะผิวหนังหนาผิดปกติ และการหลุดร่วงมากเกินไป วิตามินเอช่วยเสริมสร้างความแข็งแรงให้กับผม ฟัน และเหงือก ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา วิตามินเอมีบทบาทที่หลากหลายในการป้องกันมะเร็งและควบคุมภูมิคุ้มกัน (วิตามินเอมีความจำเป็นต่อการเสร็จสมบูรณ์ของการจับกิน เพิ่มการสังเคราะห์ Ig กระตุ้นการสร้าง T-killers กระตุ้น T-helpers ชนิดที่ 2 เป็นต้น) วิตามินเอเป็นสารต้านอนุมูลอิสระที่มีฤทธิ์ โดยออกฤทธิ์หลักในวิตามินอี ช่วยปกป้องวิตามินซีจากการออกซิเดชัน การขาดวิตามินเอถือเป็นปัจจัยเสี่ยงต่อการเกิดมะเร็ง การศึกษาเชิงทดลองแสดงให้เห็นว่าการเพิ่มปริมาณวิตามินเอในอาหารจะทำให้มีอายุขัยเฉลี่ยเพิ่มขึ้น 17.5% สังกะสีเป็นโคแฟกเตอร์ที่จำเป็นในการเผาผลาญวิตามินเอ (จำเป็นสำหรับการสังเคราะห์โปรตีนที่จับกับวิตามินเอ)

ความต้องการเรตินอลเฉลี่ยต่อวันสำหรับผู้ใหญ่ (อายุ 20-50 ปี) คือ 1.2 มก. (4,000 IU โดย 1 IU เทียบเท่ากับเรตินอล 0.3 ไมโครกรัม) สำหรับสตรีมีครรภ์ - 1.5 มก. (5,000 IU) สำหรับสตรีให้นมบุตร - 1.8 มก. (6,000 IU) สำหรับผู้ที่มีอายุมากกว่า 60 ปี - 2.5 มก. (10,000 IU) ควรให้เรตินอลแก่ร่างกายในรูปแบบสำเร็จรูปอย่างน้อยหนึ่งในสามของความต้องการต่อวัน ส่วนที่เหลือสามารถชดเชยได้โดยการรับประทานแคโรทีนอยด์ซึ่งเรตินอลจะถูกสร้างขึ้นในร่างกาย ควรคำนึงว่าเรตินอลในผลิตภัณฑ์อาหารประมาณ 30% จะถูกทำลายระหว่างการอบด้วยความร้อน กิจกรรมของเรตินอลสูงกว่าแคโรทีน 2 เท่า นอกจากนี้ แคโรทีนจะถูกดูดซึมในลำไส้เพียง 30-40% เท่านั้น ดังนั้น เมื่อประเมินการรับประทานอาหาร เชื่อว่าเรตินอล 1 มก. เทียบเท่ากับแคโรทีนอยด์ 6 มก. โดยประมาณ

การกำหนดเรตินอล (วิตามินเอ) และแคโรทีนอยด์ในซีรั่มเลือดตามวิธี Bessey ที่ปรับปรุงโดย LA Anisimova

หลักการของวิธีการ

การกำหนดวิตามินเอและแคโรทีนอยด์จะขึ้นอยู่กับการไฮโดรไลซิสในสารละลายแอลกอฮอล์ด่าง ตามด้วยการสกัดด้วยส่วนผสมของตัวทำละลายอินทรีย์

สารเคมี

• สารละลายโพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ (KOH) 11 M
• เอทิลแอลกอฮอล์ 96%
• สารละลายโพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ (KOH) 1 M ในเอทิลแอลกอฮอล์ 96%: สารละลาย KOH 11 M 1 ปริมาตรผสมกับเอทิลแอลกอฮอล์ 96% 10 ปริมาตร เตรียมรีเอเจนต์ในวันที่ทำการศึกษา หากเกิดสีระหว่างการผสม ควรทำให้แอลกอฮอล์บริสุทธิ์โดยการกลั่นก่อนใช้
• ไซลีน บริสุทธิ์ทางเคมี
• อ็อกเทน บริสุทธิ์ทางเคมี
• ส่วนผสมไซลีน-ออกเทน: เตรียมโดยการผสมไซลีนและออกเทนในปริมาณที่เท่ากัน

การศึกษาดำเนินการโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์

กระบวนการตรวจสอบวิตามินเอ

นำเลือดที่เจาะจากนิ้ว (ประมาณ 1 มล.) ใส่ในหลอดเหวี่ยง แล้วใส่ในถ้วยแก้วที่มีน้ำอุ่น (อุณหภูมิ 40-45°C) นาน 20-30 นาที เพื่อแยกซีรั่ม ให้ใช้แท่งแก้วบางๆ ดึงลิ่มเลือดอย่างระมัดระวังรอบขอบผนังหลอด แล้วปั่นที่ความเร็ว 3,000 รอบต่อนาที นาน 10 นาที

เก็บซีรั่ม 0.12 มิลลิลิตรแล้วถ่ายลงในหลอดจับตัว จากนั้นเติมสารละลายแอลกอฮอล์โพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ 1 M 0.12 มิลลิลิตร เขย่าส่วนผสมให้เข้ากัน

วางหลอดทดลองที่มีตัวอย่างในอ่างน้ำเป็นเวลา 20 นาทีที่อุณหภูมิ 60°C เพื่อดำเนินการไฮโดรไลซิส

ตัวอย่างจะถูกทำให้เย็นลงและเติมส่วนผสมไซลีน-ออกเทน 0.12 มิลลิลิตรลงไป จากนั้นเขย่าแรงๆ เป็นเวลา 10-15 วินาที จากนั้นจึงทำให้เย็นลงอีกครั้งและปั่นเหวี่ยง

ชั้นบนซึ่งประกอบด้วยวิตามินเอและแคโรทีนอยด์จะถูกกำจัดออกอย่างระมัดระวังโดยใช้ปิเปตปาสเตอร์ที่มีลูกยาง แล้วถ่ายโอนลงในไมโครคิวเวต

ตัวอย่างจะถูกวัดด้วยเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ที่ความยาวคลื่น 328 นาโนเมตรเพื่อตรวจวัดวิตามินเอ และที่ความยาวคลื่น 460 นาโนเมตรเพื่อตรวจวัดแคโรทีนอยด์

หลังจากทำการสเปกโตรโฟโตเมตรีแล้ว ตัวอย่างจะถูกฉายรังสีอัลตราไวโอเลตเพื่อทำลายวิตามินเอ โดยจะติดตั้งหลอดควอตซ์ (ฆ่าเชื้อแบคทีเรีย) ไว้ที่ระยะห่าง 15-20 ซม. จากไมโครคิวเวตต์ เพื่อให้ส่วนของคิวเวตต์ที่เต็มไปด้วยของเหลวได้รับรังสี โดยระยะเวลาการฉายรังสีคือ 45-60 นาที

ตัวอย่างจะถูกวัดด้วยสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ใหม่ที่ความยาวคลื่น 328 นาโนเมตร ปริมาณวิตามินเอจะถูกกำหนดโดยความแตกต่างของค่าการสูญพันธุ์ (ความหนาแน่นแสง) โดยคำนึงถึงค่าสัมประสิทธิ์ (ปัจจัย) 637 ที่คำนวณโดย Bessey สำหรับวิตามินเอ

การคำนวณจะดำเนินการตามสูตร:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

โดยที่ X คือปริมาณวิตามินเอ μg/dl; 637 คือค่าสัมประสิทธิ์ที่ Bessey คำนวณได้สำหรับการกำหนดค่าวิตามินเอ; E328(1) คือความหนาแน่นทางแสงของสารละลายก่อนการฉายรังสี; E328(2) คือความหนาแน่นทางแสงของสารละลายหลังจากการฉายรังสี

ค่าสัมประสิทธิ์ในการแปลงความเข้มข้นของวิตามินเอจาก µg/dL เป็น µmol/L อยู่ที่ 0.035

ปริมาณของแคโรทีนอยด์คำนวณได้จากสูตร:

เอ็กซ์ = 480-E480,

โดยที่ X คือปริมาณแคโรทีนอยด์ (μg/dl); 480 คือค่าสัมประสิทธิ์ที่คำนวณโดย Bessey สำหรับการกำหนดแคโรทีนอยด์; E480 คือความหนาแน่นทางแสงของสารละลายทดสอบ

บันทึก

ตามที่ Bessey กล่าวไว้ การใช้ซีรั่มที่มีปริมาตรมากกว่าหรือน้อยกว่านั้นในการทำการวิจัยได้ แต่สัดส่วนของซีรั่มต่อปริมาตรของสารละลายแอลกอฮอล์จะต้องคงที่ไม่ว่าปริมาตร (ปริมาณ) ของส่วนผสมไซลีน-ออกเทนจะเปลี่ยนแปลงไปอย่างไรก็ตาม

ปริมาณปกติของวิตามินเอในซีรั่มเลือดในทารกแรกเกิดและทารกคือ 160-270 μg/l ในผู้ใหญ่คือ 1.05-2.45 μmol/l (300-700 μg/l) ปริมาณแคโรทีนอยด์ในซีรั่มเลือดของผู้ใหญ่คือ 800-2300 μg/l