ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (PCR) ในการวินิจฉัยโรคติดเชื้อ

PCR เป็นวิธีการวินิจฉัย DNA วิธีหนึ่งที่ช่วยเพิ่มจำนวนสำเนาของส่วนที่ตรวจพบในจีโนม (DNA) ของแบคทีเรียหรือไวรัสได้เป็นล้านเท่าโดยใช้เอนไซม์ DNA polymerase ส่วนของกรดนิวคลีอิกที่ทดสอบซึ่งจำเพาะต่อจีโนมที่กำหนดจะถูกคูณ (ขยาย) หลายครั้ง ซึ่งทำให้สามารถระบุได้ ขั้นแรก โมเลกุล DNA ของแบคทีเรียหรือไวรัสจะถูกแบ่งออกเป็นสองสายโดยการให้ความร้อน จากนั้นในที่ที่มีไพรเมอร์ DNA ที่สังเคราะห์ขึ้น (ลำดับนิวคลีโอไทด์จะจำเพาะต่อจีโนมที่กำลังตรวจสอบ) พวกมันจะจับกับส่วนเสริมของ DNA และโซ่กรดนิวคลีอิกที่สองจะถูกสังเคราะห์หลังจากไพรเมอร์แต่ละอันในที่ที่มี DNA polymerase ที่ทนความร้อนได้ จะได้โมเลกุล DNA สองโมเลกุล กระบวนการนี้ทำซ้ำหลายครั้ง โมเลกุล DNA หนึ่งโมเลกุล เช่น แบคทีเรียหรือไวรัสหนึ่งอนุภาค ก็เพียงพอสำหรับการวินิจฉัย การนำขั้นตอนเพิ่มเติมมาใช้ในกระบวนการปฏิกิริยา - การสังเคราะห์ DNA บนโมเลกุล RNA โดยใช้เอนไซม์ reverse transcriptase - ทำให้สามารถทดสอบไวรัส RNA เช่น ไวรัส HCV ได้ PCR เป็นกระบวนการสามขั้นตอนที่ทำซ้ำเป็นวัฏจักร: การเปลี่ยนสภาพ การอบไพรเมอร์ การสังเคราะห์ DNA (พอลิเมอไรเซชัน) ปริมาณ DNA ที่สังเคราะห์ได้จะถูกระบุโดย ELISA หรืออิเล็กโทรโฟรีซิส

PCR สามารถใช้สารทางชีวภาพต่างๆ ได้ เช่น ซีรั่มหรือพลาสมาในเลือด การขูดท่อปัสสาวะ การตรวจชิ้นเนื้อ น้ำในช่องเยื่อหุ้มปอด น้ำไขสันหลัง ฯลฯ PCR ใช้เป็นหลักในการวินิจฉัยโรคติดเชื้อ เช่น ไวรัสตับอักเสบบี ไวรัสตับอักเสบซี ไวรัสตับอักเสบดี การติดเชื้อ CMV โรคติดต่อทางเพศสัมพันธ์ (หนองใน คลามีเดีย ไมโคพลาสมา การติดเชื้อยูเรียพลาสมา) วัณโรค การติดเชื้อ HIV เป็นต้น

ข้อได้เปรียบของ PCR ในการวินิจฉัยโรคติดเชื้อเมื่อเทียบกับวิธีการวิจัยอื่นๆ มีดังนี้

• สามารถตรวจพบเชื้อก่อโรคได้ในสภาพแวดล้อมทางชีวภาพใดๆ ของร่างกาย รวมถึงวัสดุที่ได้รับระหว่างการตรวจชิ้นเนื้อ
• สามารถวินิจฉัยโรคติดเชื้อได้ตั้งแต่ระยะเริ่มแรกของโรค;
• สามารถประเมินผลการวิจัยเชิงปริมาณได้ (ว่ามีไวรัสหรือแบคทีเรียจำนวนเท่าใดในวัสดุที่กำลังศึกษา)
• ความไวสูงของวิธีการ เช่น ความไวของ PCR สำหรับการตรวจหา DNA ของไวรัสตับอักเสบ B ในเลือดคือ 0.001 pg/ml (ประมาณ 4×10 ² copy/ml) ในขณะที่ความไวของวิธีการไฮบริดิเซชันของ DNA โดยใช้โพรบแบบแยกกิ่งคือ 2.1 pg/ml (ประมาณ 7×10 ⁵ copy/ml)

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ]