การวิเคราะห์ความหลากหลายของความยาวของชิ้นส่วนข้อจำกัด

การใช้เอนไซม์จำกัดเอ็นโดนิวคลีเอสต่างๆ อย่างแพร่หลายในการวิเคราะห์ดีเอ็นเอของโครโมโซมได้เผยให้เห็นถึงความแปรปรวนมหาศาลของจีโนมมนุษย์ การเปลี่ยนแปลงเพียงเล็กน้อยในบริเวณเข้ารหัสและควบคุมของยีนโครงสร้างอาจนำไปสู่การหยุดการสังเคราะห์โปรตีนบางชนิดหรือการสูญเสียหน้าที่ในร่างกายมนุษย์ ซึ่งมักส่งผลต่อลักษณะทางกายภาพของผู้ป่วย อย่างไรก็ตาม จีโนมของมนุษย์ประมาณ 90% ประกอบด้วยลำดับที่ไม่เข้ารหัส ซึ่งมีความแปรปรวนมากกว่าและมีสิ่งที่เรียกว่าการกลายพันธุ์ที่เป็นกลางหรือโพลีมอร์ฟิซึมจำนวนมาก และไม่มีการแสดงออกทางลักษณะทางกายภาพ บริเวณโพลีมอร์ฟิกเหล่านี้ (โลคัส) ใช้ในการวินิจฉัยโรคทางพันธุกรรมในฐานะเครื่องหมายทางพันธุกรรม โลคัสโพลีมอร์ฟิกมีอยู่ในโครโมโซมทั้งหมดและเชื่อมโยงกับบริเวณเฉพาะของยีน โดยการกำหนดตำแหน่งของโลคัสโพลีมอร์ฟิก ทำให้สามารถระบุได้ว่ายีนใดมีความเกี่ยวข้องกับการกลายพันธุ์ที่ทำให้เกิดโรคในผู้ป่วย

เพื่อแยกส่วนดีเอ็นเอโพลีมอร์ฟิก จะใช้เอนไซม์แบคทีเรียที่เรียกว่า รีดักเตส ซึ่งผลิตผลจากเอนไซม์ดังกล่าวคือไซต์จำกัดเอนไซม์ การกลายพันธุ์ที่เกิดขึ้นเองในไซต์โพลีมอร์ฟิกทำให้บริเวณดังกล่าวต้านทานหรือในทางกลับกัน ไวต่อการทำงานของรีดักเตสเฉพาะ

ความแปรผันของการกลายพันธุ์ในไซต์จำกัดยีนสามารถตรวจพบได้โดยการเปลี่ยนความยาวของชิ้นส่วนจำกัดยีนของดีเอ็นเอโดยแยกชิ้นส่วนเหล่านั้นโดยใช้อิเล็กโทรโฟรีซิสและไฮบริดิเซชันที่ตามมาด้วยโพรบดีเอ็นเอเฉพาะ ในกรณีที่ไม่มีการจำกัดยีนในไซต์โพลีมอร์ฟิก ชิ้นส่วนขนาดใหญ่หนึ่งชิ้นจะถูกตรวจพบบนอิเล็กโทรโฟเรแกรม และในกรณีที่มีชิ้นส่วนดังกล่าว ชิ้นส่วนขนาดเล็กกว่าจะปรากฏขึ้น การมีอยู่หรือไม่มีอยู่ของไซต์จำกัดยีนในตำแหน่งเดียวกันของโครโมโซมคู่กันทำให้สามารถติดฉลากยีนกลายพันธุ์และยีนปกติได้อย่างน่าเชื่อถือพอสมควร และติดตามการถ่ายทอดยีนดังกล่าวไปยังลูกหลานได้ ดังนั้น เมื่อศึกษาดีเอ็นเอของผู้ป่วยในโครโมโซมทั้งสองที่มีไซต์จำกัดยีนอยู่ในบริเวณโพลีมอร์ฟิก จะตรวจพบชิ้นส่วนดีเอ็นเอขนาดสั้นบนอิเล็กโทรโฟเรแกรม ในผู้ป่วยที่เป็นโฮโมไซกัสสำหรับการกลายพันธุ์ที่เปลี่ยนไซต์จำกัดยีนแบบโพลีมอร์ฟิก จะตรวจพบชิ้นส่วนที่ยาวกว่า และในผู้ป่วยที่เป็นเฮเทอโรไซกัส จะตรวจพบชิ้นส่วนขนาดสั้นและยาว

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]