Hematopoietic stem cells

เซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือด (HSCs) เป็นเซลล์ต้นกำเนิด mesenchymal มีลักษณะโดย multipotency และก่อให้เกิดเซลล์องค์ประกอบ จำกัด ซึ่งรูปแบบเซลล์เม็ดเลือดและเซลล์เนื้อเยื่อเฉพาะของระบบภูมิคุ้มกันของร่างกาย

สมมติฐานของการดำรงอยู่ของบรรพบุรุษร่วมกันของเซลล์เม็ดเลือดทั้งหมดเช่นเดียวกับคำว่า "เซลล์ต้นกำเนิด" เป็นเจ้าของโดย A. Maximov (1909) การสร้างศักยภาพของมวลมือถือจาก GSK ขนาดใหญ่. - กระดูกเซลล์ไขกระดูกก้านผลิตเซลล์วันที่ 10 ที่ทำขึ้นเม็ดเลือดของตัวเองต่อพ่วง การดำรงอยู่ของเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดได้ก่อตั้งขึ้นในปี 1961 ในการทดลองเกี่ยวกับการฟื้นตัวของโลหิตในหนูที่ได้รับยาพิษจากการสัมผัสรังสีที่ทำลายเซลล์ไขกระดูกก้าน. Pos เช่นการปลูกถ่ายเซลล์ไขกระดูก syngeneic สัตว์เพื่อฉายรังสี lethally foci ไม่ต่อเนื่องของโลหิตถูกตรวจพบในม้ามผู้รับมีแหล่งที่มาเดี่ยว - เซลล์ต้นกำเนิด clonogenic

จากนั้นก็แสดงให้เห็นถึงความสามารถของเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดเพื่อสนับสนุนตนเองซึ่งแสดงถึงการทำงานของเม็ดเลือดในระหว่างการเกิด ในกระบวนการของการพัฒนาตัวอ่อน HSCs มีลักษณะการย้ายถิ่นสูงซึ่งเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการอพยพไปยังสถานที่ของอวัยวะสร้างเม็ดเลือด คุณสมบัตินี้ของ HSCs ยังคงอยู่ใน ontogenesis - เนื่องจากการย้ายถิ่นฐานของพวกเขาคงที่ต่ออายุถาวรของสระว่ายน้ำของเซลล์ภูมิคุ้มกันที่เกิดขึ้น ความสามารถของการย้ายถิ่นของ GSK เจาะผ่านอุปสรรคเลือดเนื้อเยื่อปลูกถ่ายในการเจริญเติบโตของเนื้อเยื่อและ clonogenic พื้นฐานสำหรับเซลล์ปลูกถ่ายไขกระดูกในจำนวนของโรคที่เกี่ยวข้องกับความผิดปกติของระบบ hemopoietic

เช่นเดียวกับทรัพยากรเซลล์ต้นกำเนิดทุกเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดที่มีอยู่ในช่องของคุณ (กระดูก) ในปริมาณที่น้อยมากซึ่งจะนำไปสู่ปัญหาบางอย่างในการจัดสรรของพวกเขา HSCs มนุษย์ Immunophenotypic มีลักษณะเป็นเซลล์ CD34 + NK ความสามารถในการโอนย้ายเข้าสู่กระแสเลือดและตั้งรกรากอวัยวะของระบบภูมิคุ้มกันของร่างกายหรือ repopulate stroma ไขกระดูก มันเป็นสิ่งจำเป็นที่จะเข้าใจอย่างชัดเจนว่า GSK ไม่ได้เป็นเซลล์กระดูกอ่อนมากที่สุดและจะได้มาจากสารตั้งต้นซึ่งรวมถึง dormantnye เซลล์ fibroblast SB34 ลบ มันก็พบว่าเซลล์ที่มีฟีโนไทป์ของ CD34 สามารถที่จะเข้าสู่กระแสเลือดที่เปลี่ยนฟีโนไทป์ของพวกเขาใน CD34 + แต่การย้ายถิ่นกลับมาในไขกระดูกภายใต้อิทธิพลของจุลภาคอีกครั้งกลายเป็น CD34 ลบองค์ประกอบเซลล์ต้นกำเนิด ในขณะที่เซลล์ CD34 ไม่ตอบสนองต่อสัญญาณ stromal กฎระเบียบ paracrine (ปัจจัยการเติบโต cytokines) อย่างไรก็ตามในสถานการณ์ที่ต้องใช้ความรุนแรงขยายเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดกับ CD34 ฟีโนไทป์ตอบสนองต่อสัญญาณความแตกต่างของรูปแบบทั้งเม็ดเลือดและ mesenchymal เซลล์ต้นกำเนิด โลหิตจะดำเนินการโดยการสัมผัสโดยตรงกับ GSK องค์ประกอบมือถือของ stroma ไขกระดูกนำเสนอเครือข่ายที่ซับซ้อนของ macrophages เซลล์บุผนังหลอดเลือดตาข่าย, เซลล์สร้างกระดูก, รบรา stromal และ extracellular เมทริกซ์ ไขกระดูก stromal กรอบ - ไม่เพียง แต่เป็นเมทริกซ์หรือ "โครงกระดูก" สำหรับเนื้อเยื่อเม็ดเลือดจะดำเนินการควบคุมที่ดีของโลหิตเนื่องจากสัญญาณการกำกับดูแลของ paracrine ปัจจัยการเจริญเติบโต, cytokines และ chemokines และยังมีปฏิสัมพันธ์กาวที่จำเป็นสำหรับการก่อตัวของเซลล์เม็ดเลือด

ดังนั้นพื้นฐานของระบบเม็ดเลือดปรับปรุงอย่างต่อเนื่องเป็นที่ตั้งของ pluripotent (จากมุมมองของการ hematopoiesis) เซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดที่มีความสามารถในระยะยาวด้วยตนเองต่ออายุ ในระหว่างกระบวนการทำ HSC จะได้รับความแตกต่างหลัก ๆ และสร้างโคลนของเซลล์ที่แตกต่างกันไปในลักษณะเฉพาะของ cytomorphological และ immunophenotypic การก่อตัวของเซลล์ต้นกำเนิดที่สืบเนื่องกันมาอย่างต่อเนื่องจะเกิดขึ้นจากการก่อตัวของเซลล์บรรพบุรุษที่สามารถระบุตัวของเส้นโลหิตได้หลากหลาย ผลของขั้นตอนต่อมาของกระบวนการสร้างเม็ดเลือดหลายขั้นตอนที่ซับซ้อนคือการเจริญเติบโตของเซลล์และการปลดปล่อยออกสู่เส้นโลหิตรอบข้างขององค์ประกอบที่เป็นผู้ใหญ่ ได้แก่ เม็ดเลือดขาวเม็ดเลือดขาวเม็ดเลือดและเกล็ดเลือด

[1], [2], [3],

แหล่งที่มาของเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือด

เซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดเป็นแหล่งการศึกษาที่มีการศึกษามากที่สุดซึ่งส่วนใหญ่มาจากการใช้ในคลินิกสำหรับการปลูกถ่ายไขกระดูก ได้อย่างรวดเร็วก่อนเป็นที่รู้จักกันเป็นอย่างมากเกี่ยวกับเซลล์เหล่านี้ ที่มีขอบเขตนี้เป็นจริงตั้งแต่ระดับกลางและผู้ใหญ่ลูกหลาน GSK - องค์ประกอบมือถือที่แพงที่สุดซึ่งแต่ละ (เม็ดเลือดแดงเม็ดเลือดขาวลิมโฟไซต์, monocytes / macrophages และเกล็ดเลือด) มีการศึกษาอย่างทั่วถึงในทุกระดับ - จากแสงกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนจาก ลักษณะทางชีวเคมีและภูมิคุ้มกันบกพร่องก่อนการจำแนกโดยการวิเคราะห์ PCR อย่างไรก็ตามการตรวจสอบการดำเนินการโดยก้าน ultrastructural ชีวเคมี immunophenotypic และพารามิเตอร์ชีวฟิสิกส์ของจีโนมของ GSK ยังไม่ได้ผลคำตอบประเด็นปัญหาหลายวิธีซึ่งเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการพัฒนาของการปลูกถ่ายเซลล์ มันยังคงไม่ได้จัดตั้งกลไกรักษาเสถียรภาพ GSK ในรัฐอยู่เฉยๆพวกเขาจะเปิดใช้งานเข้าสู่ขั้นตอนของการแบ่งสมมาตรหรือไม่สมมาตรและที่สำคัญที่สุด - ความมุ่งมั่นให้กับการศึกษาที่แตกต่างกันตามหน้าที่เซลล์เม็ดเลือดเม็ดเลือดแดงเม็ดเลือดขาว, เซลล์เม็ดเลือดขาวและเกล็ดเลือด

การปรากฏตัวในเซลล์ไขกระดูกที่มีฟีโนไทป์ของ CD34 ซึ่งเป็นบรรพบุรุษของทั้งสอง mesenchymal และเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดได้ยกคำถามของการดำรงอยู่ของใกล้ที่เก่าแก่เซลล์ CD34 ลบในความแตกต่างของเซลล์ต้นกำเนิดและสาย stromal เม็ดเลือดที่ วิธีการเพาะปลูกเป็นเวลานานได้มาจากสิ่งที่เรียกว่าวัฒนธรรมในระยะยาว "เริ่มต้น 'เซลล์ (ระยะยาววัฒนธรรมเริ่มต้นมือถือ - LTC-IC) อายุการใช้งานของเซลล์ต้นกำเนิดดังกล่าวในอดีตอาณานิคมของกิจกรรม stromal ไขกระดูกขึ้นอยู่กับการรวมกันของปัจจัยการเจริญเติบโตเป็นมากกว่า 5 สัปดาห์ที่ผ่านมาในขณะที่มีชีวิตของหน่วยอาณานิคมขึ้นรูปความมุ่งมั่น (CFU) ในวัฒนธรรมเพียง 3 สัปดาห์ที่ผ่านมา เป็นที่เชื่อกันว่าในปัจจุบัน LTC-IC - GCW อนาล็อกทำงานเป็น repopulyatsionnom ที่มีศักยภาพสูงประมาณ 20% LTC-IC มีลักษณะฟีโนไทป์ CD34 + CD38- และแสดงความจุสูงสำหรับตนเองต่ออายุ เซลล์ดังกล่าวพบในไขกระดูกมนุษย์ที่มีความถี่ของการ 01:50 000 แต่ก็ควรจะได้รับการยอมรับเซลล์เม็ดเลือด limfoidoinitsiiruyuschie-ใกล้เคียงกับ HSC ซึ่งจะได้รับภายใต้เงื่อนไขของระยะยาว (15 สัปดาห์) ของวัฒนธรรม เซลล์ดังกล่าวจะกำหนดให้เป็น LTC หมู่มนุษย์เซลล์ไขกระดูกที่พบใน 10 ครั้งน้อยกว่า LTC-IC และจะเกิดเป็นเซลล์เม็ดเลือดและลำต้น hemopoietic ต่อมน้ำเหลือง

แม้ว่าการติดฉลากเม็ดเลือดเซลล์ต้นกำเนิดกับโคลนอลแอนติบอดีตามบัตรประจำตัวของ immunophenotypic เป็นวิธีการหลักในการระบุและการเรียงลำดับการคัดเลือกของเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดที่มีการใช้ทางคลินิกที่มีศักยภาพของการทุ่มเท GSK จึง จำกัด การปิดกั้น CD34 แอนติบอดีรับหรือแอนติเจนเครื่องหมายอื่น ๆ ในระหว่างการเรียงลำดับ immunopositive อย่างหลีกเลี่ยงไม่ได้เปลี่ยนแปลงคุณสมบัติของเซลล์ที่แยกกับมัน เป็นที่นิยมมากขึ้นคือการหลั่ง immuno-negative ของ HSC บนคอลัมน์แม่เหล็ก อย่างไรก็ตามในกรณีนี้การเรียงลำดับมักจะใช้โคลนอลแอนติบอดีคงที่ในการสนับสนุนโลหะ นอกจากนี้ที่สำคัญทั้งสองวิธีการจัดสรรของ GSK ขึ้นอยู่กับฟีโนไทป์มากกว่าลักษณะการทำงาน ดังนั้นนักวิจัยหลายคนชอบที่จะใช้การวิเคราะห์ของพารามิเตอร์ clonogenic GSK ซึ่งจะช่วยให้ขนาดและองค์ประกอบของอาณานิคมเพื่อตรวจสอบระดับของการกำหนดและทิศทางของความแตกต่างของเซลล์ต้นกำเนิด เป็นที่ทราบกันว่าในกระบวนการของการกระทำจำนวนของเซลล์และจำนวนของชนิดในอาณานิคมที่จะลดลง เซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดและเซลล์ลูกสาวในช่วงต้นเรียกว่า "granulocyte-เม็ดเลือดแดงหน่วย monocyte-megakariotsitokolonieobrazuyuschaya" (ไอ้เวร-GEMM) สร้างวัฒนธรรม multilinear อาณานิคมขนาดใหญ่ที่มีตามลำดับ granulocytes เม็ดเลือดแดง, monocytes และ megakaryocytes อยู่ด้านล่างหน่วยบรรทัด granulocyte เชื้อสายมุ่งมั่น monotsitokolonieobrazuyuschaya (ไอ้เวร-GM) สร้างอาณานิคมของ granulocytes และขนาดใหญ่และ granulocytic อดีตอาณานิคมหน่วย (ไอ้เวร-G) - เพียงอาณานิคมเล็ก ๆ ของ granulocytes ผู้ใหญ่ เม็ดเลือดแดงบรรพบุรุษในช่วงต้น - หน่วยของเซลล์เม็ดเลือดแดง burstoobrazuyuschaya (ไอ้เวร-E) - เป็นแหล่งที่มาของเซลล์เม็ดเลือดแดงอาณานิคมขนาดใหญ่และเป็นผู้ใหญ่มากขึ้นการจัดตั้งหน่วย (ไอ้เวร-E) - การขนาดเล็กอาณานิคมของเซลล์เม็ดเลือดแดง ในประชากรทั่วไปกับการเจริญเติบโตของเซลล์ในสื่อ semisolid สามารถระบุเซลล์รูปหกชนิดของอาณานิคม myeloid นี้: ไอ้เวร-GEMM, GM-ไอ้เวร, ไอ้เวร-G, M-ไอ้เวร, VFU-E และ E-ไอ้เวร)

อย่างไรก็ตามนอกเหนือไปจากอนุพันธ์เกี่ยวกับการสร้างเม็ดเลือด, วัสดุต้นทางสำหรับการแยกสาร HSC ประกอบด้วยเซลล์ที่มีร่วมกันจำนวนมาก ในการนี้จำเป็นต้องมีการทำให้บริสุทธิ์ก่อนการปลูกถ่ายเซลล์ต้นกำเนิดของระบบภูมิคุ้มกันของผู้บริจาคก่อน โดยปกติแล้วจะใช้วิธี immunosection บนพื้นฐานของการแสดงออกของแอนติเจนที่จำเพาะต่อลิมโฟซัยต์ซึ่งทำให้สามารถแยกและกำจัดเชื้อเหล่านี้ได้โดยใช้ monoclonal antibodies นอกจากนี้การปลูกถ่ายไขกระดูกเทคนิค immunorozetochnaya T-เม็ดเลือดขาวหมดซึ่งจะขึ้นอยู่กับการก่อตัวของสารประกอบเชิงซ้อนของ CD4 + lymphocytes และโคลนอลแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจงได้อย่างมีประสิทธิภาพลบออกโดยใช้ apheresis เทคนิคนี้ให้วัสดุเซลล์บริสุทธิ์ที่มีเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดขาว 40-60%

การเพิ่มจำนวนของเซลล์ต้นกำเนิดเนื่องจากการกำจัดของเซลล์เม็ดเลือดผู้ใหญ่จากผลิตภัณฑ์ leukapheresis ที่จะประสบความสำเร็จโดยการหมุนเหวี่ยงทวนตามด้วยการกรอง (ในที่ที่มี chelator - การ citrate ไตรโซเดียม) ผ่านคอลัมน์ที่มีเส้นใยไนลอนเคลือบด้วยอิมมูโนมนุษย์ การใช้ลำดับของทั้งสองเทคนิคให้การทำความสะอาดที่สมบูรณ์ของการรับสินบนจากเกล็ดเลือดโดย 89% - การของเม็ดเลือดแดงและโดย 91% - จากเม็ดเลือดขาว เนื่องจากความสูญเสียของ HSC ลดลงอย่างมากระดับเซลล์ CD34 + ในมวลเซลล์ทั้งหมดสามารถเพิ่มได้ถึง 50%

สำหรับลักษณะการทำงานของเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดแดงที่แยกได้จะใช้ความสามารถในการสร้างโคโลนีขององค์ประกอบเลือดผู้ใหญ่ในวัฒนธรรม การวิเคราะห์อาณานิคมที่เกิดขึ้นทำให้สามารถระบุและหาจำนวนชนิดของเซลล์ต้นกำเนิดระดับการกระทำของพวกเขาและเพื่อกำหนดทิศทางของความแตกต่างของพวกเขา methylcellulose, agar, plasma หรือ fibrin gel ซึ่งจะช่วยลดการเคลื่อนไหวของเซลล์ซึ่งจะช่วยป้องกันสิ่งที่แนบมากับพื้นผิวของแก้วหรือพลาสติก ภายใต้ภาวะการเพาะเลี้ยงที่ดีที่สุดโคลนจากเซลล์เดียวจะพัฒนาภายใน 7-18 วัน ถ้ามีน้อยกว่า 50 เซลล์ในโคลนมันจะถูกระบุว่าเป็นกลุ่มเดียวถ้าจำนวนเซลล์เกินกว่า 50 - เป็นอาณานิคม จำนวนเซลล์ที่สามารถสร้างอาณานิคม (colony forming units - CFU หรือ colony-forming cell - COCs) ถูกนำมาพิจารณา มันควรจะตั้งข้อสังเกตว่าค่าพารามิเตอร์และ CFU COC ไม่ตรงกับจำนวน HSC ระงับเซลล์แม้ว่ามันจะมีความสัมพันธ์กับอีกครั้งเน้นถึงความจำเป็นในการระบุการทำงาน (อดีตอาณานิคม) กิจกรรมของ HSCs ในหลอดทดลอง

ในบรรดาเซลล์ของไขกระดูกเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดมีศักยภาพในการงอกสูงที่สุดเนื่องจากมีการสร้างโคโลนีที่ใหญ่ที่สุดในวัฒนธรรม โดยจำนวนอาณานิคมดังกล่าวมีการเสนอทางอ้อมเพื่อกำหนดจำนวนของเซลล์ต้นกำเนิด หลังจากการก่อตัวของอาณานิคมในหลอดทดลองเกิน 0.5 มิลลิเมตรและมีจำนวนของเซลล์ 1000 ผู้เขียนได้ทดสอบความมั่นคงของเซลล์เหล่านี้จะร้ายแรงขนาด 5-fluorouracil และตรวจสอบความสามารถในการเพิ่มจำนวนประชากรไขกระดูก lethally สัตว์ฉายรังสี ตามตัวแปรเหล่านี้เซลล์ที่แยกได้ไม่ต่างจาก HSC มากนักและได้รับเครื่องหมายย่อว่า HPP-CFC - colony-forming cells ที่มีศักยภาพในการเกิด proliferative สูง

การค้นหาความเป็นไปได้ที่จะมีการคัดเลือกเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดให้มีคุณภาพมากขึ้นอย่างต่อเนื่อง อย่างไรก็ตามเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดที่มีสัณฐานคล้ายกับเซลล์เม็ดเลือดขาวและคอลเลกชันค่อนข้างสม่ำเสมอของเซลล์ที่มีเกือบตลอดนิวเคลียสโครมาติและอนุภาค slabobazofilnoy จำนวนเล็ก ๆ ของพลาสซึม จำนวนที่แน่นอนยังยากที่จะกำหนด สันนิษฐานว่า GSK ในไขกระดูกของคนเกิดขึ้นด้วยความถี่ 1 ต่อ 106 เซลล์ที่มีนิวเคลียส

การระบุเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือด

เพื่อปรับปรุงตัวของเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดจะดำเนินการตามลำดับหรือพร้อมกัน (บน Tere ซอร์หลายช่อง) วิจัย membrannosvyazannyh สเปกตรัมของแอนติเจนซึ่งใน GSK ฟีโนไทป์ CD34 + CD38 ควรจะรวมกับการขาดของตัวบ่งชี้ความแตกต่างเชิงเส้นโดยเฉพาะอย่างยิ่งแอนติเจนของเซลล์ immunocompetent เช่น CD4 และภูมิคุ้มกันบกพร่องพื้นผิว glycophorin

ในทางปฏิบัติทุกรูปแบบของ phenotyping ของเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดรวมถึงการกำหนดของแอนติเจน CD34 ไกลโคโปรตีนนี้มีมวลโมเลกุลประมาณ 110 กิโลดาลตันแบกเว็บไซต์ glycosylation หลายแสดงบนเยื่อหุ้มเซลล์พลาสม่าหลังจากการเปิดใช้งานของยีนบนโครโมโซมที่มีการแปล 1 การทำงานของโมเลกุล CD34 เกี่ยวข้องกับการปฏิสัมพันธ์ของ L-selectin-mediated ของเซลล์ปูตินเม็ดเลือดแดงในช่วงต้นที่มีฐาน stromal strokal staphal แต่ก็ควรจะจำได้ว่าการปรากฏตัวของ CD34 แอนติเจนบนผิวเซลล์ช่วยให้เพียง แต่จะทำให้การประเมินเบื้องต้นของเนื้อหาของ GSK ในเซลล์แขวนลอยในขณะที่มันจะแสดงและเซลล์อื่น ๆ เม็ดเลือดต้นกำเนิดและเซลล์ stromal ไขกระดูกและเซลล์บุผนังหลอดเลือด

ในระหว่างการแตกต่างของเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดขาวการแสดงออก CD34 จะลดลงอย่างถาวร เซลล์เม็ดเลือดแดงเม็ดเลือดเม็ดเลือดขาวและ monocyte ได้รับการยืนยันว่ามีแอนติเจน CD34 อ่อนแอหรือไม่มีอยู่บนพื้นผิวทั้งหมด (phenotype CD34) ในเยื่อหุ้มเซลล์ของเซลล์ที่แตกต่างของไขกระดูกและเซลล์เม็ดเลือดที่โตเต็มที่จะไม่พบแอนติเจน CD34

มันควรจะตั้งข้อสังเกตว่าในการเปลี่ยนแปลงของความแตกต่างของเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดที่ไม่เพียง แต่ช่วยลดระดับการแสดงออกของ CD34 แต่ขนานแสดงออกเพิ่มขึ้นมีความก้าวหน้าของ CD38 แอนติเจน - ไกลโคโปรตีนเยื่อหนึ่งมีน้ำหนักโมเลกุล 46 kDa มี NAD-glikogidrolaznoy และกิจกรรม cyclase ADP-ribosyl แนะนำการมีส่วนร่วม ในการขนส่งและการสังเคราะห์ ADP-ribose ดังนั้นจึงมีความเป็นไปได้ที่จะมีการควบคุมระดับการทำงานของเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือด (Hematopoietic progenitor cells) ประชากรของเซลล์ที่มีฟีโนไทป์ CD34 + CD38 + 90-99% CD34 บวกเซลล์ไขกระดูกประกอบด้วยเซลล์ต้นกำเนิดที่มีการ จำกัด การเจริญที่มีศักยภาพและความแตกต่างในขณะที่มีฟีโนไทป์ CD34 + CD38 เซลล์สามารถเรียกร้อง GSK บทบาท

แท้จริงจำนวนประชากรของเซลล์ไขกระดูกที่อธิบายโดยสูตร CD34 + CD38- มีจำนวนเซลล์ต้นกำเนิดดั้งเดิมที่ค่อนข้างมากซึ่งสามารถแยกความแตกต่างของทิศทางของ myeloid และ lymphoid ได้ ในบริบทของการเพาะปลูกในระยะยาวกับฟีโนไทป์ของเซลล์ CD34 + CD38- การจัดการเพื่อให้ได้ทุกเซลล์เม็ดเลือดผู้ใหญ่: นิวโทรฟิ eosinophils, basophils, monocytes, megakaryocytes เม็ดเลือดแดงและเซลล์เม็ดเลือดขาว

ค่อนข้างเร็ว ๆ นี้พบว่าเซลล์ CD34 บวกแสดงอีกสองเครื่องหมาย - AC133 และ CD90 (เจ้า-1) ซึ่งถูกนำมาใช้เพื่อระบุเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือด พระองค์-1 แอนติเจนเป็นผู้ร่วมแสดงกับตัวรับ CD117 (c-KIT) บน CD34 + เซลล์ไขกระดูก, สายและเลือด phosphatidylinositol binding glycoprotein มีน้ำหนักโมเลกุล 25-35 kDa ซึ่งมีส่วนร่วมในกระบวนการยึดเกาะของเซลล์ ผู้เขียนบางคนเชื่อว่าแอนติเจนของ Thy-1 เป็นเครื่องหมายของเซลล์ CD34 ที่ไม่สมบูรณ์ที่สุด เซลล์ที่ทำสำเนาด้วยตัวเองด้วยฟีโนไทป์ CD34 + Thy-1 + ทำให้เกิดเส้นที่ยาวนานขึ้นด้วยการสร้างเซลล์ลูกสาว แนะนำว่าแอนติเจนของ Thy-1 บล็อกสัญญาณควบคุมที่ทำให้การแบ่งเซลล์หยุดลง แม้จะมีความจริงที่ว่า CD34 + Tu1 เซลล์ + มีความสามารถของตัวเองการต่ออายุและการสร้างสายการเพาะเลี้ยงในระยะยาว, ฟีโนไทป์ของพวกเขาไม่สามารถที่เกี่ยวข้อง แต่เพียงผู้เดียวกับ HSC เป็นเจ้า-1 + เนื้อหาในน้ำหนักรวมของ CD34 บวกองค์ประกอบมือถืออยู่ที่ประมาณ 50% ไกลเกิน จำนวนเซลล์เม็ดเลือด

มีแนวโน้มมากขึ้นในการระบุเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดคือ AC133 ซึ่งเป็นเครื่องหมายแอนติเจนของเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดซึ่งการตรวจพบครั้งแรกของเซลล์ตับมีการตรวจพบ AC133 เป็นเมมเบรนไกลโคโปรตีนที่ปรากฏบนพื้นผิวของเยื่อหุ้มเซลล์ในช่วงแรกของการสุกของ GSK - เป็นไปได้ว่าแม้แต่ก่อนหน้านี้มากกว่าแอนติเจน CD34 ในการศึกษาของ A. Petrenko และ V. Grishchenko (2003) พบว่า AC133 แสดงออกถึง 30% ของเซลล์ CD34 บวกของตับตัวอ่อน

ดังนั้นรายละเอียดที่เหมาะฟีโนไทป์ของเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดโดยแนวความคิดในวันนี้ผลรวมของร่างเซลล์ในวงจรซึ่งจะต้องนำเสนอ CD34 แอนติเจนกำหนดค่า AC133 และพระองค์-1 แต่มีสถานที่สำหรับการคาดการณ์โมเลกุล CD38 ไม่มี HLA-DR และเครื่องหมายความแตกต่างเชิงเส้นเกรดเฉลี่ย , CD3, CD4, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20

GSK เปลี่ยนแปลงฟีโนไทป์ภาพอาจจะมีการรวมกันของ CD34 + CD45RalowCD71low เนื่องจากคุณสมบัติของเซลล์อธิบายโดยสูตรนี้ไม่แตกต่างจากพารามิเตอร์การทำงานของเซลล์ที่มีฟีโนไทป์ CD34 + CD38 นอกจากนี้มนุษย์ HSC สามารถระบุได้โดยสัญญาณฟีโนไทป์ CD34 + เจ้า-L + CD38Iow / 'C-KIT / ต่ำ - เพียง 30 ของเซลล์เหล่านี้อย่างสมบูรณ์เรียกคืนโลหิตในหนูที่ผ่านการฉายรังสี lethally

จากการวิเคราะห์ของลักษณะฟีโนไทป์ทั่วไปของเซลล์ไขกระดูกจริงเริ่มต้น 40 ปีของการวิจัยอย่างเข้มข้น GSK พร้อมกันความสามารถของทั้งสองต่ออายุตัวเองและความแตกต่างกับองค์ประกอบโทรศัพท์มือถืออื่น ๆ ที่ช่วยให้การปรับใช้การปลูกถ่ายไขกระดูกในการรักษาโรคต่างๆของระบบ hemopoietic เซลล์ต้นกำเนิดใหม่ที่เพิ่งค้นพบเมื่อเร็ว ๆ นี้ยังไม่ได้รับการยอมรับอย่างแพร่หลายในการปฏิบัติทางคลินิก อย่างไรก็ตามเซลล์ต้นกำเนิดจากสายสะดือ (สาย) ในเลือดและตับของทารกในครรภ์อย่างมีนัยสำคัญสามารถขยายปลูกถ่ายเซลล์ไม่เพียง แต่ในทางโลหิตวิทยา แต่ยังอยู่ในสาขาอื่น ๆ ของยาที่แตกต่างกันจาก HSC ไขกระดูกเป็นผลการดำเนินงานเชิงปริมาณและลักษณะคุณภาพ

แทนที่มวลเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดที่จำเป็นสำหรับการปลูกจะได้รับโดยทั่วไปจากไขกระดูกต่อพ่วงและเลือดจากสายสะดือเช่นเดียวกับตับของตัวอ่อน นอกจากนี้เซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดสามารถหาได้โดยการขยายพันธุ์ในหลอดทดลองของ ESC และความแตกต่างที่ตามมาของพวกเขาในการกำหนดเป้าหมายเม็ดเลือดองค์ประกอบมือถือ A. Petrenko โวลต์ Grishchenko (2003) ถูกต้องชี้ให้เห็นความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญคุณสมบัติภูมิคุ้มกันและความสามารถในการเรียกคืนโลหิต GSK ต้นกำเนิดที่แตกต่างกันเนื่องจากอัตราส่วนที่ไม่เท่ากันมีอยู่ในแหล่งที่มาของพวกเขา pluripotent ต้นและบรรพบุรุษมุ่งมั่นในภายหลัง นอกจากนี้เซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดที่ได้จากแหล่งกำเนิดที่แตกต่างกันมีความสัมพันธ์ที่แตกต่างกันอย่างสิ้นเชิงของเซลล์ที่ไม่ใช่ hemopoietic ในเชิงปริมาณและมีคุณภาพ

แหล่งกำเนิดเซลล์เม็ดเลือดเดิมคือไขกระดูก การระงับเซลล์ไขกระดูกจะได้มาจากกระดูกหรือกระดูกโดยการชะล้างด้วยยาชาเฉพาะที่ สารแขวนลอยที่ได้จากการทดลองนี้จึงไม่เหมือนกันและมีส่วนผสมของ HSC องค์ประกอบของเซลล์ Stromal ความมุ่งมั่นของเซลล์ต้นกำเนิดของเส้นเลือดและเส้น Lymphoid ตลอดจนองค์ประกอบของเลือดที่ครบถ้วน จำนวนเซลล์ที่มีฟีโนไทป์ CD34 + และ CD34 + CD38 ในเซลล์เม็ดเลือดขาวมีค่าเท่ากับ 0.5 ถึง 3.6 และ 0 ถึง 0.5% ตามลำดับ เลือดนอกระบบหลังจากการกระตุ้น HSC จาก G-CSF มี CD34 + 0.4-1.6% และ CD34 + CD38 0-0.4%

ร้อยละที่สูงขึ้นของเซลล์ที่มี CD34 + CD38 immunophenotype และเลือดจากสายสะดือ CD34 + - และ 0-0.6 OD-2.6% และจำนวนสูงสุดของพวกเขามีการตรวจพบในหมู่เซลล์ตับของทารกในครรภ์เม็ดเลือด - และ 2,3 0,2-12,5 -35.8% ตามลำดับ

แต่คุณภาพของวัสดุที่รับสินบนขึ้นอยู่ไม่เพียงกับจำนวนเงินที่มีอยู่ในนั้นของ CD34 เซลล์ + แต่ยังเกี่ยวกับกิจกรรมการทำงานของพวกเขาซึ่งสามารถประเมินตามระดับของการสร้างอาณานิคมในร่างกาย (ไขกระดูก repopulation ในสัตว์ฉายรังสี lethally) และในหลอดทดลอง - การเจริญเติบโตของโคโลนีบนสื่อผสมสูตร . มันก็พบว่าอาณานิคมการขึ้นรูปและกิจกรรมการเจริญของเซลล์ต้นกำเนิด hemopoietic กับฟีโนไทป์ CD34 + CD38 HLA-DR ที่แยกได้จากตับของทารกในครรภ์ไขกระดูกทารกในครรภ์และเลือดจากสายสะดือและมากเกินกว่าความสามารถในการเจริญของเม็ดเลือดเซลล์อาณานิคมขึ้นรูปของไขกระดูกและเลือดของผู้ใหญ่ การวิเคราะห์เชิงปริมาณและเชิงคุณภาพของ HSC จากแหล่งต่างๆพบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญทั้งในเนื้อหาสัมพัทธ์ของพวกเขาในการระงับเซลล์และความสามารถในการทำงาน มีจำนวนเซลล์ CD34 + (24.6%) สูงสุดในวัสดุปลูกถ่ายที่ได้รับจากไขกระดูกในครรภ์ ไขกระดูกของคนผู้ใหญ่มีส่วนประกอบของเซลล์ CD34 ถึง 2.1% ท่ามกลางเซลล์โมโนนิวเคลียร์ของเลือดมนุษย์ผู้ใหญ่เพียง 0.5% มีฟีโนไทป์ CD34 + ในขณะที่เลือดจากสายสะดือจำนวนของพวกเขาถึง 2% ดังนั้นอดีตอาณานิคมความสามารถของ CD34 + เซลล์ไขกระดูกของทารกในครรภ์ 2.7 ครั้งเกินความจุของการเจริญเติบโต clonal ของไขกระดูกเม็ดเลือดของเซลล์ของมนุษย์ที่เป็นผู้ใหญ่และเซลล์เลือดจากสายสะดือรูปแบบอาณานิคมที่มีขนาดใหญ่มากกว่าองค์ประกอบเม็ดเลือดที่แยกได้จากเลือดของผู้ใหญ่: 65.5-40 และ , 8 โคโลนี / 105 เซลล์ตามลำดับ

ความแตกต่างในกิจกรรมการเจริญและอาณานิคมขึ้นรูปความสามารถของเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดที่เกี่ยวข้องไม่เพียง แต่มีองศาที่แตกต่างของการกำหนด แต่ยังมีจุลภาคธรรมชาติของพวกเขา เป็นที่รู้จักกันว่าความรุนแรงของการแพร่กระจายและความแตกต่างของเซลล์ต้นกำเนิดความเร็วที่กำหนดโดยมีอิทธิพลต่อการกำกับดูแลหนึ่งของระบบ multi-component ของปัจจัยการเจริญเติบโตและ cytokines ที่มีการผลิตโดยทั้งเซลล์ต้นกำเนิดและองค์ประกอบของเซลล์จุลภาคเมทริกซ์ stromal โดยใช้ประชากรเซลล์บริสุทธิ์และสื่อฟรีเซรั่มที่มีมุมมองในการเพาะเลี้ยงเซลล์ให้ปัจจัยการเจริญเติบโตโดดเด่นที่มีผลกระตุ้นและยับยั้งเซลล์ต้นกำเนิดของระดับต่างๆเซลล์ต้นกำเนิดและเซลล์ของความมุ่งมั่นในทิศทางเชิงเส้นโดยเฉพาะอย่างยิ่ง ผลของการศึกษาที่ดำเนินการยืนยันอย่างถี่ถ้วนยืนยันว่า GSK ซึ่งได้มาจากแหล่งต่างๆที่มีพัฒนาการ ontogenetic แตกต่างกันมีความแตกต่างกันทั้งในด้าน phenotypically และ functionalally สำหรับ GSK อยู่ในขั้นตอนก่อนหน้าของ ontogeny โดยมีศักยภาพในการทำสำเนาด้วยตัวเองและกิจกรรมการขยายตัวที่สูง เซลล์ดังกล่าวมีความโดดเด่นด้วยความยาวของเทลอมเมอร์และอาจมีการก่อตัวของเซลล์เม็ดเลือดขาวทั้งหมด ปฏิกิริยาของระบบภูมิคุ้มกันต่อต้นกำเนิดตัวอ่อน HSC จะล่าช้าเนื่องจากเซลล์ดังกล่าวแสดงโมเลกุล HLA อย่างอ่อนโยน มีการไล่โทนที่ชัดเจนของเนื้อหาญาติของ HSCs และความสามารถในตัวเองต่ออายุและจำนวนสายที่พวกเขาในรูปแบบประเภทของความมุ่งมั่นคือ CD34 + เซลล์ตับของทารกในครรภ์> CD34 + เซลล์ของเลือดจากสายสะดือ> CD34 + เซลล์ไขกระดูก มันเป็นสิ่งสำคัญที่แตกต่างดังกล่าวจะไม่ซ้ำกันในการโยกย้ายงานทั้งและนีโอ postanatalnomu ช่วงต้น ๆ ของการพัฒนามนุษย์ แต่ยังทั่ว ontogeny - proliferative และอดีตอาณานิคมกิจกรรมของ HSCs มาจากไขกระดูกหรือเลือดของผู้ใหญ่สัดส่วนผกผันกับอายุของผู้บริจาค